大豆葉綠體轉化載體pJY系列的構建及其在煙草上的轉化研究

為解決雜交大豆(Glycine max)制種過程中不育系易與保持系混雜的問題,開展了大豆葉綠體轉基因的研究.通過轉基因方法在不育系的細胞質中植入篩選標記基因,以區(qū)分不育系和保持系.根據(jù)已發(fā)表的大豆葉綠體序列(GenBank X07675)設計引物,用PCR方法獲得兩段大豆葉綠體同源重組序列LHRR和RHRR,克隆到質粒pUC19中,并將來源于質粒pTF102的壯觀霉素抗性基因aadA克隆到兩段同源重組序列之間,以構建大豆葉綠體轉化表達載體pJY01.aadA基因的啟動子Prrn和終止子psbA基因3′序列,分別從煙草葉綠體基因組中擴增而來.在此基礎上,將草丁膦抗性基因或綠色熒光蛋白與GUS的融合蛋白基因克隆到該載體上,得到pJY03與pJY04,并初步應用于煙草(Nicotiana tobacum)的葉綠體轉化,獲得了具壯觀霉素抗性的綠色愈傷和幼苗,PCR擴增出aadA基因的條帶,并在激光共聚焦掃描下檢測到GFP的表達.

作 者： 陳颯 李金耀 吳平 孫寰 趙麗梅 壽惠霞 CHEN Sa LI Jin-yao WU Ping SUN Huan ZHAO Li-mei SHOU Hui-xia   作者單位： 陳颯,吳平,壽惠霞,CHEN Sa,WU Ping,SHOU Hui-xia(浙江大學生命科學學院,杭州,310029)

李金耀,LI Jin-yao(浙江大學生命科學學院,杭州,310029;新疆大學生命科學學院,烏魯木齊,830046)

孫寰,趙麗梅,SUN Huan,ZHAO Li-mei(國家轉基因植物中試與產(chǎn)業(yè)化基地,公主嶺,136100) 

刊 名： 農(nóng)業(yè)生物技術學報  ISTIC PKU 英文刊名： JOURNAL OF AGRICULTURAL BIOTECHNOLOGY  年，卷(期)： 2006 14(6)  分類號： S188  關鍵詞： 大豆   葉綠體轉化   表達載體   GFP  

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